ファシリテーター

樽井　直樹（株式会社SEEDSUPPLY）
神崎　直之（株式会社SEEDSUPPLY）
岡部　隆義（東京大学創薬機構）
 

参加者

24名

概要

始めに岡部から、幹事会として「Affinity　selection」を新規テーマに選んだ経緯説明、及び事前アンケートの集計結果紹介があった。アンケートからは参加者のほとんどが初心者である事が判明したので、今年度WSは、講演主体で進めることにした。

これを受け樽井が「Affinity Selectionの原理と応用例」と題した講演を行い、binder　selection技術、Merck、Novartis他海外大手の事例、自社SEEDSUPPLYの具体例を解説した。講演途中を含め参加者からは活発な質問があり、期待、興味の高さをうかがわせた。
主な質疑応答の内容を以下に記す。

実験条件に関して

Q：MSにかける前のタンパク除去は？
A：逆相カラム前にプレフィルターを付けてタンパクをトラップしている。プレフィルターは詰まり易いので頻繁に交換している。

Q：SECはカラムとプレートのどちらが良いのか。膜タンパクの時はどちらがお勧めか？
A：どちらも海外大手で採用されているので、問題は無いと思う。SEEDSUPPLYでは扱いやすさから、プレート法を採用した。膜タンパクに対してはG50を用いたプレート法で可能である。

Q：SEC後タンパクから化合物を外すことができるのか？
A：分析用の移動相（アセトニトリルとギ酸）が入れば外れる。

Q：非特異結合の除去は？
A：精製タンパクでないときは、mockとの比較が必要、精製タンパクなら不要である。

Q：弱いaffinityの化合物は取りそこなうことが多いように思うが？
A：タンパク濃度、化合物濃度を変える。SECでは素早く分離することが肝である。

化合物ライブラリーに関して

Q：MSの検出は？
A：分子量は重ならないようにグルーピングする。全部パラメータを取っている。MSの取れない化合物は入れない。適切なライブラリーの構築は成功率を上げるために重要である。

Q：化合物の溶解性は気にした方が良いか？
A：指標として、（SEEDSUPPLYでは）緩衝液中で濃度30uMでも解けるものにしている。溶解度の確認は、光散乱と顕微鏡で確認した。