「TR-FRET法その原理とスクリーニングへの応用」

講師：
セティ・メディカルラボ株式会社　佐倉事業所　試薬課
徳田千賀志様

　Time-resolved fluorescence resonance energy transfer（TR-FRET）法は、時間分解蛍光測定（TRF）と蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）を組み合わせた、生体分子間の相互作用解析お よび検出技術であり、High Throughput Screening (HTS) に幅広く応用されている。
　HTSにおいて、蛍光測定法 を利用する際の問題点は、被検物質由来のフィルター効果、クエンチング効果、自家蛍光等に起因する偽陽性、偽陰性結果であり、これらの要因で引き起こされ る信頼性低下への対策が、時間分解蛍光測定（TRF）である。加えて、HTSには高い処理能力が求められることから、洗浄・分離操作の不要なホモジニアス アッセイが必須である。そこで前述のTRFと、ホモジニアスアッセイを実現する蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）を組み合わせた技術がTR-FRET法 である。

　本チュートリアルでは、TR-FRET法の代表的な技法のひとつであるHomogeneous time resolved fluorescence (HTRF)を例に、その原理と特性を解説すると共に、HTSへの応用例（GPCR、各種酵素活性測定、レセプター・リガンド結合、高次構造変化等）を紹 介する。